化工进展 ›› 2022, Vol. 41 ›› Issue (2): 938-950.DOI: 10.16085/j.issn.1000-6613.2021-0531
唐文秀1,2(), 王学明1,2, 郭亮1,2, 季立豪1,2, 高聪1,2, 陈修来1,2, 刘立明1,2()
收稿日期:
2021-03-16
修回日期:
2021-04-16
出版日期:
2022-02-05
发布日期:
2022-02-23
通讯作者:
刘立明
作者简介:
唐文秀(1995—),女,硕士研究生,研究方向为发酵工学。E-mail:基金资助:
TANG Wenxiu1,2(), WANG Xueming1,2, GUO Liang1,2, JI Lihao1,2, GAO Cong1,2, CHEN Xiulai1,2, LIU Liming1,2()
Received:
2021-03-16
Revised:
2021-04-16
Online:
2022-02-05
Published:
2022-02-23
Contact:
LIU Liming
摘要:
琥珀酸(succinic acid)是一种四碳二羧酸,在食品、医药、塑料和化工行业具有广泛的应用。目前,微生物法生产琥珀酸存在得率低、生产强度低、副产物积累等问题。为此,本研究通过复合诱变(ARTP和60Co-γ射线)筛选到一株耐高渗突变株FMME-N-2,其琥珀酸得率为0.70g/g葡萄糖,同时积累18.8g/L乳酸、7.6g/L甲酸和17.3g/L乙酸。为了提高琥珀酸得率,通过敲除乳酸脱氢酶基因(ldhA)、丙酮酸-甲酸裂解酶-甲酸转运蛋白基因(pflB-focA)、磷酸转乙酰基基因(pta)、丙酸激酶基因(tdcD)和a-酮丁酸甲酸酯裂解酶基因(tdcE),阻断冗余代谢支路减少副产物积累,获得工程菌株FMME-N-13,琥珀酸得率增加到0.92g/g葡萄糖,同时副产物大大降低,积累0.6g/L乳酸、3.6g/L甲酸和12.3g/L乙酸。同时,通过调控RBS强度组合优化来自产琥珀酸放线杆菌的磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶基因(AsPCK)和来自博伊丁假丝酵母的甲酸脱氢酶基因(CbFDH)的表达水平,调控胞内ATP和NADH的浓度,最优工程菌FMME-N-26(FMME-N-13-L-AsPCK-L-CbFDH)的琥珀酸得率增加至1.04g/g葡萄糖,仅积累5.5g/L乙酸;最终,对厌氧阶段葡萄糖浓度进行优化,当葡萄糖浓度控制在0~5g/L时,菌株FMME-N-26的琥珀酸浓度增加到111.9g/L,得率为1.11g/g葡萄糖(理论产率的99%),生产强度为1.76g/L/h,为琥珀酸的工业化生产奠定了良好的基础。
中图分类号:
唐文秀, 王学明, 郭亮, 季立豪, 高聪, 陈修来, 刘立明. 代谢工程改造大肠杆菌生产琥珀酸[J]. 化工进展, 2022, 41(2): 938-950.
TANG Wenxiu, WANG Xueming, GUO Liang, JI Lihao, GAO Cong, CHEN Xiulai, LIU Liming. Metabolic engineering of Escherichia coli to produce succinic acid[J]. Chemical Industry and Engineering Progress, 2022, 41(2): 938-950.
菌株/质粒 | 相关特性 | 来源 |
---|---|---|
质粒 | ||
pKD4 | oriR6Kγ,Kan,rgnB(Ter) | 本研究室 |
pKD46 | pSC101ts ori,bla,PBAD,gam,bet,exo | 本研究室 |
pCP20 | pSC101ts ori,Cm,Flp | 本研究室 |
pETM6R1 | ColE1 ori,Amp,PTac | 本研究构建 |
pETM6R1-AsPCK | ColE1 ori,Amp,PTac,AsPCK | 本研究构建 |
pETM6R1-CbFDH | ColE1 ori,Amp,PTac,CbFDH | 本研究构建 |
pETM6R1-AsPCK- CbFDH | ColE1 ori,Amp,PTac,AsPCK,CbFDH, | 本研究构建 |
pETM6R1-RBS10(H)-AsPCK-RBS09(M)-CbFDH | ColE1 ori,Amp,PTac,AsPCK,CbFDH,RBS10,RBS09 | 本研究构建 |
pETM6R1-RBS10(H)-AsPCK-RBS03(L)-CbFDH | ColE1 ori,Amp,PTac,AsPCK,CbFDH,RBS10,RBS03 | 本研究构建 |
pETM6R1-H-AsPCK-H-CbFDH | ColE1 ori,Amp,PTac,AsPCK,CbFDH,RBS10,RBS10 | 本研究构建 |
pETM6R1-M-AsPCK-M-CbFDH | ColE1 ori,Amp,PTac,AsPCK,CbFDH,RBS09,RBS09 | 本研究构建 |
pETM6R1-M-AsPCK-L-CbFDH | ColE1 ori,Amp,PTac,AsPCK,CbFDH,RBS09,RBS03 | 本研究构建 |
pETM6R1-M-AsPCK-H-CbFDH | ColE1 ori,Amp,PTac,AsPCK,CbFDH,RBS09,RBS10 | 本研究构建 |
pETM6R1-L-AsPCK-M-CbFDH | ColE1 ori,Amp,PTac,AsPCK,CbFDH,RBS03,RBS09 | 本研究构建 |
pETM6R1-L-AsPCK-L-CbFDH | ColE1 ori,Amp,PTac,AsPCK,CbFDH,RBS03,RBS03 | 本研究构建 |
pETM6R1-L-AsPCK-H-CbFDH | ColE1 ori,Amp,PTac,AsPCK,CbFDH,RBS03,RBS10 | 本研究构建 |
菌株 | ||
E. coli JM109 | General cloning host | Addgene |
E. coli FMME-N | Wild type screened from rumen of camel(preservation number,CCTCC M2018568) | 本研究室 |
FMME-N-1 | After ARTP mutagenesis breeding from FMME-N | 本研究室筛选 |
FMME-N-2 | After60Co-γ irradiation mutagenesis breeding from FMME-N-1 | 本研究室筛选 |
FMME-N-3 | FMME-N-2 ΔpflB-focA | 本研究构建 |
FMME-N-4 | FMME-N-2 ΔldhA | 本研究构建 |
FMME-N-5 | FMME-N-2 Δpta | 本研究构建 |
FMME-N-6 | FMME-N-2 ΔackA | 本研究构建 |
FMME-N-7 | FMME-N-2 ΔpflB-focAΔldhA | 本研究构建 |
FMME-N-8 | FMME-N-2 ΔpflB-focAΔpta | 本研究构建 |
FMME-N-9 | FMME-N-2 ΔpflB-focAΔackA | 本研究构建 |
FMME-N-10 | FMME-N-2 ΔpflB-focAΔldhAΔpta | 本研究构建 |
FMME-N-11 | FMME-N-2 ΔpflB-focAΔldhAΔackA | 本研究构建 |
FMME-N-12 | FMME-N-2 ΔpflB-focAΔldhAΔptaΔackA | 本研究构建 |
FMME-N-13 | FMME-N-2 ΔpflB-focAΔldhAΔptaΔtdcDΔtdcE | 本研究构建 |
FMME-N-14 | FMME-N-13 pETM6R1-AsPCK | 本研究构建 |
FMME-N-15 | FMME-N-13 pETM6R1-CbFDH | 本研究构建 |
FMME-N-16 | FMME-N-13 pETM6R1-AsPCK-CbFDH | 本研究构建 |
FMME-N-17 | FMME-N-13 pETM6R1-H-AsPCK-M-CbFDH | 本研究构建 |
FMME-N-18 | FMME-N-13 pETM6R1-H-AsPCK-L-CbFDH | 本研究构建 |
FMME-N-19 | FMME-N-13 pETM6R1-H-AsPCK-H-CbFDH | 本研究构建 |
FMME-N-20 | FMME-N-13 pETM6R1-M-AsPCK-M-CbFDH | 本研究构建 |
FMME-N-21 | FMME-N-13 pETM6R1-M-AsPCK-L-CbFDH | 本研究构建 |
FMME-N-22 | FMME-N-13 pETM6R1-M-AsPCK-H-CbFDH | 本研究构建 |
FMME-N-23 | FMME-N-13 pETM6R1-L-AsPCK-M-CbFDH | 本研究构建 |
FMME-N-24 | FMME-N-13 pETM6R1-L-AsPCK-L-CbFDH | 本研究构建 |
FMME-N-25 | FMME-N-13 pETM6R1-L-AsPCK-H-CbFDH | 本研究构建 |
FMME-N-26 | FMME-N-13-L-AsPCK-L-CbFDH | 本研究构建 |
表1 本研究所使用的菌种和质粒
菌株/质粒 | 相关特性 | 来源 |
---|---|---|
质粒 | ||
pKD4 | oriR6Kγ,Kan,rgnB(Ter) | 本研究室 |
pKD46 | pSC101ts ori,bla,PBAD,gam,bet,exo | 本研究室 |
pCP20 | pSC101ts ori,Cm,Flp | 本研究室 |
pETM6R1 | ColE1 ori,Amp,PTac | 本研究构建 |
pETM6R1-AsPCK | ColE1 ori,Amp,PTac,AsPCK | 本研究构建 |
pETM6R1-CbFDH | ColE1 ori,Amp,PTac,CbFDH | 本研究构建 |
pETM6R1-AsPCK- CbFDH | ColE1 ori,Amp,PTac,AsPCK,CbFDH, | 本研究构建 |
pETM6R1-RBS10(H)-AsPCK-RBS09(M)-CbFDH | ColE1 ori,Amp,PTac,AsPCK,CbFDH,RBS10,RBS09 | 本研究构建 |
pETM6R1-RBS10(H)-AsPCK-RBS03(L)-CbFDH | ColE1 ori,Amp,PTac,AsPCK,CbFDH,RBS10,RBS03 | 本研究构建 |
pETM6R1-H-AsPCK-H-CbFDH | ColE1 ori,Amp,PTac,AsPCK,CbFDH,RBS10,RBS10 | 本研究构建 |
pETM6R1-M-AsPCK-M-CbFDH | ColE1 ori,Amp,PTac,AsPCK,CbFDH,RBS09,RBS09 | 本研究构建 |
pETM6R1-M-AsPCK-L-CbFDH | ColE1 ori,Amp,PTac,AsPCK,CbFDH,RBS09,RBS03 | 本研究构建 |
pETM6R1-M-AsPCK-H-CbFDH | ColE1 ori,Amp,PTac,AsPCK,CbFDH,RBS09,RBS10 | 本研究构建 |
pETM6R1-L-AsPCK-M-CbFDH | ColE1 ori,Amp,PTac,AsPCK,CbFDH,RBS03,RBS09 | 本研究构建 |
pETM6R1-L-AsPCK-L-CbFDH | ColE1 ori,Amp,PTac,AsPCK,CbFDH,RBS03,RBS03 | 本研究构建 |
pETM6R1-L-AsPCK-H-CbFDH | ColE1 ori,Amp,PTac,AsPCK,CbFDH,RBS03,RBS10 | 本研究构建 |
菌株 | ||
E. coli JM109 | General cloning host | Addgene |
E. coli FMME-N | Wild type screened from rumen of camel(preservation number,CCTCC M2018568) | 本研究室 |
FMME-N-1 | After ARTP mutagenesis breeding from FMME-N | 本研究室筛选 |
FMME-N-2 | After60Co-γ irradiation mutagenesis breeding from FMME-N-1 | 本研究室筛选 |
FMME-N-3 | FMME-N-2 ΔpflB-focA | 本研究构建 |
FMME-N-4 | FMME-N-2 ΔldhA | 本研究构建 |
FMME-N-5 | FMME-N-2 Δpta | 本研究构建 |
FMME-N-6 | FMME-N-2 ΔackA | 本研究构建 |
FMME-N-7 | FMME-N-2 ΔpflB-focAΔldhA | 本研究构建 |
FMME-N-8 | FMME-N-2 ΔpflB-focAΔpta | 本研究构建 |
FMME-N-9 | FMME-N-2 ΔpflB-focAΔackA | 本研究构建 |
FMME-N-10 | FMME-N-2 ΔpflB-focAΔldhAΔpta | 本研究构建 |
FMME-N-11 | FMME-N-2 ΔpflB-focAΔldhAΔackA | 本研究构建 |
FMME-N-12 | FMME-N-2 ΔpflB-focAΔldhAΔptaΔackA | 本研究构建 |
FMME-N-13 | FMME-N-2 ΔpflB-focAΔldhAΔptaΔtdcDΔtdcE | 本研究构建 |
FMME-N-14 | FMME-N-13 pETM6R1-AsPCK | 本研究构建 |
FMME-N-15 | FMME-N-13 pETM6R1-CbFDH | 本研究构建 |
FMME-N-16 | FMME-N-13 pETM6R1-AsPCK-CbFDH | 本研究构建 |
FMME-N-17 | FMME-N-13 pETM6R1-H-AsPCK-M-CbFDH | 本研究构建 |
FMME-N-18 | FMME-N-13 pETM6R1-H-AsPCK-L-CbFDH | 本研究构建 |
FMME-N-19 | FMME-N-13 pETM6R1-H-AsPCK-H-CbFDH | 本研究构建 |
FMME-N-20 | FMME-N-13 pETM6R1-M-AsPCK-M-CbFDH | 本研究构建 |
FMME-N-21 | FMME-N-13 pETM6R1-M-AsPCK-L-CbFDH | 本研究构建 |
FMME-N-22 | FMME-N-13 pETM6R1-M-AsPCK-H-CbFDH | 本研究构建 |
FMME-N-23 | FMME-N-13 pETM6R1-L-AsPCK-M-CbFDH | 本研究构建 |
FMME-N-24 | FMME-N-13 pETM6R1-L-AsPCK-L-CbFDH | 本研究构建 |
FMME-N-25 | FMME-N-13 pETM6R1-L-AsPCK-H-CbFDH | 本研究构建 |
FMME-N-26 | FMME-N-13-L-AsPCK-L-CbFDH | 本研究构建 |
培养基 | 成分 |
---|---|
LB培养基 | 蛋白胨10g?L-1,酵母粉5g?L-1,氯化钠10g?L-1 |
固体筛选培养基 | 葡萄糖16g?L-1,酵母粉5g?L-1,蛋白胨5g?L-1,NaCl 1.5g?L-1,KH2PO4 1.16g?L-1,K2HPO4 0.5g?L-1,MgSO4·7H2O 0.3g?L-1,NaHCO3 0.4g?L-1,溴甲酚紫0.05g?L-1,琼脂粉20g?L-1,添加相应浓度的NaCl |
发酵培养基 | 葡萄糖20g?L-1,玉米浆5g?L-1,(NH4)2SO4 3.3g?L-1,KH2PO4 0.6g?L-1,K2HPO4 1.4g?L-1,NaCl 1g?L-1,MgSO4·7H2O 0.4g?L-1 |
抗生素 | 氨苄青霉素(Amp),硫酸卡那霉素(Kan),氯霉素(Chl) |
诱导剂 | IPTG,阿拉伯糖 |
表2 本研究所用的培养基及其抗生素
培养基 | 成分 |
---|---|
LB培养基 | 蛋白胨10g?L-1,酵母粉5g?L-1,氯化钠10g?L-1 |
固体筛选培养基 | 葡萄糖16g?L-1,酵母粉5g?L-1,蛋白胨5g?L-1,NaCl 1.5g?L-1,KH2PO4 1.16g?L-1,K2HPO4 0.5g?L-1,MgSO4·7H2O 0.3g?L-1,NaHCO3 0.4g?L-1,溴甲酚紫0.05g?L-1,琼脂粉20g?L-1,添加相应浓度的NaCl |
发酵培养基 | 葡萄糖20g?L-1,玉米浆5g?L-1,(NH4)2SO4 3.3g?L-1,KH2PO4 0.6g?L-1,K2HPO4 1.4g?L-1,NaCl 1g?L-1,MgSO4·7H2O 0.4g?L-1 |
抗生素 | 氨苄青霉素(Amp),硫酸卡那霉素(Kan),氯霉素(Chl) |
诱导剂 | IPTG,阿拉伯糖 |
参数 | 处理条件 |
---|---|
载气 | He |
输出功率 | 100W |
辐照距离 | 2mm |
气体流量 | 10 SLM |
辐照时间 | 0s、15s、30s、45s、46s、75s、90s |
表3 ARTP处理条件
参数 | 处理条件 |
---|---|
载气 | He |
输出功率 | 100W |
辐照距离 | 2mm |
气体流量 | 10 SLM |
辐照时间 | 0s、15s、30s、45s、46s、75s、90s |
引物 | 序列(5’→3’) |
---|---|
QC-pflB-focA-S | TTACTCCGTATTTGCATAAAAACCATGCGAGTTACGGGCCTATAAGTGTAGGCTGGAGCTGCTTC |
QC-pflB-focA-A | ATAGATTGAGTGAAGGTACGAGTAATAACGTCCTGCTGCTGTTCTCATATGAATATCCTCCTTAG |
QC-ldhA-S | ATGAACTCGCCGTTTTATAGCACAAAACAGTACGACAAGAAGTACGTGTAGGCTGGAGCTGCTTC |
QC-ldhA-A | TTAAACCAGTTCGTTCGGGCAGGTTTCGCCTTTTTCCAGATTGCTCATATGAATATCCTCCTTAG |
QC-pta-S | GTGTCCCGTATTATTATGCTGATCCCTACCGGAACCAGCGTCGGTGTGTAGGCTGGAGCTGCTTC |
QC-pta-A | TTACTGCTGCTGTGCAGACTGAATCGCAGTCAGCGCGATGGTGTACATATGAATATCCTCCTTAG |
QC-ackA-S | ATGTCGAGTAAGTTAGTACTGGTTCTGAACTGCGGTAGTTCTTCAGTGTAGGCTGGAGCTGCTTC |
QC-ackA-A | TCAGGCAGTCAGGCGGCTCGCGTCTTGCGCGATAACCAGTTCTTCCATATGAATATCCTCCTTAG |
KZ-tdcD-Up-S | AAAACTGCAGCAAAGCGCAGAATATTCCAGT |
KZ-tdcD-Up-A/KZ-tdcD-Down-S | TCTCTACAATACTTCAACTAAACTCTTTTCTCATCCTGAGTTACG |
KZ-tdcD-Down-A | CCGCTCGAGACATCAAATACGCCCTGGTTATG |
TKZ-sgClpXP-F-tdcE | ACTAGTTTGTGGGAAAAAGTAATGGAGTTTTAGAGCTAGAAATAGCAAGT |
KZ-tdcE-Up-S | AAAACTGCAGTCGCCAGCCAAACCAACCAGAG |
KZ-tdcE-Up-A/KZ-tdcE-Down-S | CTTTTTCATACATCCTCCGGCGGAAAAATAATCTCTCTACAATAC |
KZ-tdcD-Down-A | CCGCTCGAGTTGAAAATATCGAATGCACTAA |
YZ-pflB-focA-S | TAAGGTTAAATATCGGTAATTTGTATTTAATAAAT |
YZ-pflB-focA-A | TTTCTCCAGATGTGGCCCATCTGA |
YZ-ldhA-S | TGTGGCATGTTTAACCGTTCAGTT |
YZ-ldhA-A | TACTTTCTTCATTGTGGTTCTCAATTA |
YZ-pta-S | CGCAACCTGGCTGCACGTTTC |
YZ-pta-A | ATTGCGGACATAGCGCAAATATT |
YZ-ackA-S YZ-ackA-A | ATTACGCAAAATGGCATAGACTCAAG AACGCCTTTGCGTTCCATTGCAC |
KZ-AsPCK-S | AAGAAGGAGATATACATATGGCACATGACTGACTTAAACAAACT |
KZ-AsPCK-A | GCAGCGGTTTCTTTACCAGATTATGCTTTTGGACCGGCGCCAAC |
KZ-CbFDH-S | AGAAGGAGATATACATATGGATGGGTAAACCAAAGGTATT |
KZ-CbFDH-A | GCAGCGGTTTCTTTACCAGATTACTTTTTTTCTCTTTGAC |
KZ-EcPCK-S | AGAAGGAGATATACATATGGATGCGCGTTAACAATGGTTTGA |
KZ-EcPCK-A | GCAGCGGTTTCTTTACCAGATTACAGTTTCGGACCAGCCGCTA |
L-AsPCK-S | GAAGATCTCTAGA |
M-AsPCK-S | GAAGATCTCTAGA |
H-AsPCK-S | GAAGATCTCTAGA |
AsPCK-A | GCGAATTCTTATGCTTTTGGACCGGCGCCAAC |
L-CbFDH-S | CGAGCTCAGACGACATAACGTTAGAAAAGAATAAGGTAGTTTCATATGGATGGGTAAACCAAAGGTAT |
M-CbFDH-S | CGAGCTCAGATATTTAAACTATCACGACATAAGGAGGTCAGGGATATGGATGGGTAAACCAAAGGTAT |
H-CbFDH-S | CGAGCTCAGAAAGAGGGCGCGGCAGAGAAGGAGGAGGTAAGAAATATGGATGGGTAAACCAAAGGTAT |
CbFDH-A | GGCTCGAGTTACTTTTTTTCTCTTTGACCA |
TKZ-sgClpXP-F-EcPCK | ATGTCATGACCCAGCTGCTCGTTTTAGAGCTAGAAATAGCAAGT |
ZH-AsPCK-CbFDH-S | GATAAGATGGGGTGTCTGGGGTAATTTGACAATTAATCATCCGGCTCG |
ZH-AsPCK-CbFDH-A | CACGAGGGTTTGCAGAAGAGGAAGACAAAAAACCCCTCAAGACCCGTTT |
表4 本研究所使用的引物
引物 | 序列(5’→3’) |
---|---|
QC-pflB-focA-S | TTACTCCGTATTTGCATAAAAACCATGCGAGTTACGGGCCTATAAGTGTAGGCTGGAGCTGCTTC |
QC-pflB-focA-A | ATAGATTGAGTGAAGGTACGAGTAATAACGTCCTGCTGCTGTTCTCATATGAATATCCTCCTTAG |
QC-ldhA-S | ATGAACTCGCCGTTTTATAGCACAAAACAGTACGACAAGAAGTACGTGTAGGCTGGAGCTGCTTC |
QC-ldhA-A | TTAAACCAGTTCGTTCGGGCAGGTTTCGCCTTTTTCCAGATTGCTCATATGAATATCCTCCTTAG |
QC-pta-S | GTGTCCCGTATTATTATGCTGATCCCTACCGGAACCAGCGTCGGTGTGTAGGCTGGAGCTGCTTC |
QC-pta-A | TTACTGCTGCTGTGCAGACTGAATCGCAGTCAGCGCGATGGTGTACATATGAATATCCTCCTTAG |
QC-ackA-S | ATGTCGAGTAAGTTAGTACTGGTTCTGAACTGCGGTAGTTCTTCAGTGTAGGCTGGAGCTGCTTC |
QC-ackA-A | TCAGGCAGTCAGGCGGCTCGCGTCTTGCGCGATAACCAGTTCTTCCATATGAATATCCTCCTTAG |
KZ-tdcD-Up-S | AAAACTGCAGCAAAGCGCAGAATATTCCAGT |
KZ-tdcD-Up-A/KZ-tdcD-Down-S | TCTCTACAATACTTCAACTAAACTCTTTTCTCATCCTGAGTTACG |
KZ-tdcD-Down-A | CCGCTCGAGACATCAAATACGCCCTGGTTATG |
TKZ-sgClpXP-F-tdcE | ACTAGTTTGTGGGAAAAAGTAATGGAGTTTTAGAGCTAGAAATAGCAAGT |
KZ-tdcE-Up-S | AAAACTGCAGTCGCCAGCCAAACCAACCAGAG |
KZ-tdcE-Up-A/KZ-tdcE-Down-S | CTTTTTCATACATCCTCCGGCGGAAAAATAATCTCTCTACAATAC |
KZ-tdcD-Down-A | CCGCTCGAGTTGAAAATATCGAATGCACTAA |
YZ-pflB-focA-S | TAAGGTTAAATATCGGTAATTTGTATTTAATAAAT |
YZ-pflB-focA-A | TTTCTCCAGATGTGGCCCATCTGA |
YZ-ldhA-S | TGTGGCATGTTTAACCGTTCAGTT |
YZ-ldhA-A | TACTTTCTTCATTGTGGTTCTCAATTA |
YZ-pta-S | CGCAACCTGGCTGCACGTTTC |
YZ-pta-A | ATTGCGGACATAGCGCAAATATT |
YZ-ackA-S YZ-ackA-A | ATTACGCAAAATGGCATAGACTCAAG AACGCCTTTGCGTTCCATTGCAC |
KZ-AsPCK-S | AAGAAGGAGATATACATATGGCACATGACTGACTTAAACAAACT |
KZ-AsPCK-A | GCAGCGGTTTCTTTACCAGATTATGCTTTTGGACCGGCGCCAAC |
KZ-CbFDH-S | AGAAGGAGATATACATATGGATGGGTAAACCAAAGGTATT |
KZ-CbFDH-A | GCAGCGGTTTCTTTACCAGATTACTTTTTTTCTCTTTGAC |
KZ-EcPCK-S | AGAAGGAGATATACATATGGATGCGCGTTAACAATGGTTTGA |
KZ-EcPCK-A | GCAGCGGTTTCTTTACCAGATTACAGTTTCGGACCAGCCGCTA |
L-AsPCK-S | GAAGATCTCTAGA |
M-AsPCK-S | GAAGATCTCTAGA |
H-AsPCK-S | GAAGATCTCTAGA |
AsPCK-A | GCGAATTCTTATGCTTTTGGACCGGCGCCAAC |
L-CbFDH-S | CGAGCTCAGACGACATAACGTTAGAAAAGAATAAGGTAGTTTCATATGGATGGGTAAACCAAAGGTAT |
M-CbFDH-S | CGAGCTCAGATATTTAAACTATCACGACATAAGGAGGTCAGGGATATGGATGGGTAAACCAAAGGTAT |
H-CbFDH-S | CGAGCTCAGAAAGAGGGCGCGGCAGAGAAGGAGGAGGTAAGAAATATGGATGGGTAAACCAAAGGTAT |
CbFDH-A | GGCTCGAGTTACTTTTTTTCTCTTTGACCA |
TKZ-sgClpXP-F-EcPCK | ATGTCATGACCCAGCTGCTCGTTTTAGAGCTAGAAATAGCAAGT |
ZH-AsPCK-CbFDH-S | GATAAGATGGGGTGTCTGGGGTAATTTGACAATTAATCATCCGGCTCG |
ZH-AsPCK-CbFDH-A | CACGAGGGTTTGCAGAAGAGGAAGACAAAAAACCCCTCAAGACCCGTTT |
菌株 | 琥珀酸浓度/g?L-1 | ||||
---|---|---|---|---|---|
第四代 | 第八代 | 第十二代 | 第十六代 | 第二十代 | |
FMME-N | 23.2±0.1 | 21.8±0.3 | 22.3±0.2 | 21.5±0.4 | 20.2±0.5 |
FMME-N-2 | 35.6±0.2 | 35.8±0.3 | 36.8±0.6 | 35.5±0.4 | 36.1±0.2 |
表5 FMME-N-2突变株的遗传稳定性
菌株 | 琥珀酸浓度/g?L-1 | ||||
---|---|---|---|---|---|
第四代 | 第八代 | 第十二代 | 第十六代 | 第二十代 | |
FMME-N | 23.2±0.1 | 21.8±0.3 | 22.3±0.2 | 21.5±0.4 | 20.2±0.5 |
FMME-N-2 | 35.6±0.2 | 35.8±0.3 | 36.8±0.6 | 35.5±0.4 | 36.1±0.2 |
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