李迅,仲惠,王亮亮,邓若冰,高红,王飞
LI Xun,ZHONG Hui,WANG Liangliang,DENG Ruobing,GAO Hong,WANG Fei
摘要: 将来自腾冲菌的脂肪酶(LipA)基因(lipA)克隆到大肠杆菌表达载体pET28a(含T7启动子)和pTrc99A(含Trc启动子)中,转入大肠杆菌表达,发现Trc启动子更适合LipA的表达。通过热处理和DEAE-Sepharose阴离子柱纯化过程,重组LipA得到纯化,比酶活达到1.9U/mg,重组LipA分子量为42kDa。重组LipA在80℃、pH 4.5时酶活最高,经85℃保温2h,酶活保持60%以上;在pH值4.0~6.0之间,LipA具有较好的稳定性;Cu2+和Zn2+对酶活力分别有38.9%和69.2%的抑制作用,Mn2+、Co2+和Tween-20对该酶有较大的激活作用;以p-nitrophenyl-laurate (p-NP-C12)为底物时,该酶的Km值为1.5mmol/L,kcat为34.5s?1。
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